[摘要]：本课题论文由两个绝对孤独的宗派结合。：最要紧的宗派,斑马鱼化食器官急变的正向遗传配制品；居第二位的宗派,斑马鱼Ubel蛋白质的的原核表达、精制和对称体发生。到这地步，它是划分解说的。：斑马鱼为小型亚热带淡水湖搜寻。且,斑马鱼因其唯一的优势,变成羊膜生物胚胎新产品的抱负典范。斑马鱼照料唤起,大概学期跑到性成熟。。鸡蛋的每周捏造,胚胎是透明的的，在母体外新产品。,它极端地西装大规模的孟德尔基因配制品。。肠和肝都是由内胚层新产品而来的。,无论如何,我们家到目前为止还微暗。,两者都的分子机制有何异同？。开场白这个问题,配制品出无遗传差别的遗传筛查,肝、肠缺点的急变株,以细查对这两大器官新产品有冲击力力的急变孟德尔基因。仅仅因为其赢利性高、无网站应用偏爱的事物特点。搜集斑马鱼胚胎用于全胚胎原位横渡试验,探头采取肠道种特点标示物和肝种特点M IFABP,按照表型出路统计数字和孟德尔遗传法制决定其双亲即使为促使隐性现象急变的杂合急变。配制品是在F2代中停止的。,有缺陷的疑似急变被我们家停止进行。。脱掉由高急变B触发某事的非遗传急变表型,我们家横渡F2疑似急变杂合子与野生型,添加F3代的配制品。配制品出78个急变孟德尔颜料体组,我们家从22个F2家系中获得物了37个F3急变。。这37个F3急变的分型,出路查明，31的急变在肝脏和肠道金中都有缺陷。,4个“肠道种特点急变”和2个“肝脏种特点急变”使著名上涨肠道或肝脏一切的令人伤心或痛苦的的缺陷表型。这些消息暗示,斑马鱼中调控肝脏和肠道新产品的遗传因子大都是使巩固或平稳的的。急变的推动课题,抱有希望的让我们家对斑马鱼及其它羊膜生物化食器官新产品的分子机制有更深的了解。泛蛋白化是一种ATP求助于的审核,需求E1（泛素致活酶）、E2（泛素移换酶）、公共的三种酶（E3连接酶）的协同达到结尾的。通常,单泛蛋白化加以润色时尚的亚细胞奔赴或招,K48多泛蛋白化加以润色招致恶化靶亲,经过26S蛋白质的恶化比较地多泛蛋白化底物的承认,把它洼起来、小肽段恶化。泛蛋白化道路是最短的PE恶化至关要紧,从酵母到哺乳生物的都是守旧的。。泛蛋白化不仅是细胞定态的结症,它对数不清的人类不健康有很大的冲击力。。泛素求助于蛋白质的的恶化常被用来班长细胞。,课题人员查明，蛋白质的质恶化抑制的人抑制剂可用于T。。UBE1是E1，泛蛋白化起注意要的功能,泛素链的最要紧的步是不成缺少的。,对细胞分裂、的要紧财富，如区别和抵消，是极端地要紧的。因为UBE1创作和生物化学成份课题,泛素常规路线相关性酶和蛋白质的质的课题,高干净的UBE1蛋白质的质不成断绝关系。率先,我们家将斑马鱼ube1孟德尔基因全长CDS序列复制进pSUMO(pET28a-SUMO)表达搬运器,当时的转向E.coli BL21表达菌株,亲和层析法精制UBE1蛋白质的。无论如何,kaumas蓝颜料,精制的蛋白质的诈骗高比的杂蛋白质的。Western 横渡出路显示,集中的蛋白质的质是全长UBE1蛋白质的参加,在原核表达的开端,所以冲击力后续的蛋白质的质精制。。随后,我们家时尚战略,将Ube1蛋白质的碳端105个aa的编码核蛋白质序列复制进pET28a表达搬运器,当时的转向E.coli BL21表达菌株,用亲和层析法精制尤贝尔 c'terminal短肽,出路是高干净的蛋白质的质战利品。。以蛋白质的质战利品为反日、雄性兔作试验生物,UBE1对称体捏造。Western 横渡出路显示,UBE1对称体捏造任务,高滴度。反日对称体亲和精制法,前述的UBE1对称体精制,对称体种特点明显上涨。,对称体回收百分数在25%下。。
[音阶赋予单位]：西北大学人员
[度]：硕士
[赋予当年的音阶]：2015
[归类号]：S917.4
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